Resinas de afinidade para proteínas marcadas com GST

A Glutationa S-transferase (GST) é uma proteína de 211 aminoácidos (26 kDa) cuja sequência de DNA é frequentemente integrada em vetores de expressão para a produção de proteínas recombinantes. O resultado da expressão deste vetor é uma proteína de fusão marcada com GST, na qual a proteína funcional GST (26 kDa) é fundida ao N-terminus da proteína recombinante.

Como a GST se dobra rapidamente em uma proteína estável e altamente solúvel após a tradução, a inclusão da etiqueta GST frequentemente promove maior expressão e solubilidade das proteínas recombinantes do que a expressão sem a etiqueta. Além disso, as proteínas de fusão marcadas com GST podem ser purificadas ou detectadas com base na capacidade da GST (uma enzima) de se ligar ao seu substrato, o glutationa (GSH).

A cromatografia de afinidade utilizando glutathion-agarose permite uma purificação rápida, suave, não desnaturante e altamente seletiva de proteínas que contêm sequências de ligação ao glutationa, como Glutationa S-Transferase (GST), glutationa peroxidase e glicoxalase I.

A eluição da proteína marcada com GST é realizada com glutationa livre no tampão de eluição. A afinidade da Glutationa S-Transferase pelo glutationa livre é maior do que a afinidade pelo glutationa imobilizado ligado à matriz de agarose. Portanto, a glutationa livre substitui o glutationa imobilizado, o que leva à liberação da proteína marcada com GST da matriz.