Eletroforese de proteínas é uma técnica de eletroforese em gel que permite a análise de uma mistura de proteínas. O gel utilizado é composto por acrilamida, que polimeriza para formar uma rede de malha. A eletroforese em gel permite que as proteínas sejam separadas para análise e depende da capacidade das proteínas carregadas de migrarem através da malha de um gel quando uma corrente elétrica é aplicada.
A análise de uma mistura por eletroforese em gel é realizada em proteínas desnaturadas, ou seja, proteínas que perderam suas estruturas terciária e secundária. Um detergente aniônico cobre as cadeias poliméricas desnaturadas, conferindo-lhes uma carga (razão carga constante/aminoácido). As proteínas individuais em uma mistura complexa são assim revestidas com cargas negativas. Quando uma tensão contínua é aplicada entre as extremidades de um gel contendo a mistura de proteínas, as proteínas migram através das malhas do gel.
Princípios de Separação
- Peso Molecular: A malha do gel retém mais as moléculas maiores do que as menores. Moléculas de menor peso molecular migram mais rápido através do gel.
- Densidade do Gel: A resolução de separação pode ser ajustada usando géis com diferentes densidades de malha.
- Marcador de Peso Molecular: Usado durante a migração para fornecer uma escala de referência, permitindo determinar o tamanho de cada proteína.
Visualização de Proteínas
Após a migração, as proteínas são visualizadas usando colorações específicas. A coloração mais comumente usada é o azul Coomassie, mas a coloração com prata também é possível. Marcadores de peso molecular auxiliam na determinação do tamanho das proteínas na mistura.
